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      沙門氏菌檢驗方法及注意事項

      作者:   發布時間:2020-05-18 16:06:11   瀏覽量:
      1.1 沙門氏菌檢驗方法
      按照 GB 4789.4-2010,沙門氏菌檢驗有 5 個基本步驟:前增菌 (BPW 增菌液,36 ℃土 1 ℃,8 h-18 h); 選擇性增菌 (TIB,42 ℃土 1℃, 18 h-24 h 和 SC,36 ℃土 1℃, 18 h-24 h) ;選擇性平板分離 (BS,36℃土 1℃,40 h-48 h; XLD 或 HE 或沙門氏菌顯色培養基,36℃土 1℃, 18 h-24 h) ;生化試驗,鑒定到屬;血清凝集試驗。
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      1.2 前增菌、選擇性增菌試驗注意事項
      a) 前增菌所使用的 BPW 增菌液是使處于瀕死狀態的沙門氏菌恢復活力,沒有添加任何的抑菌劑,增菌時間為 8 h-18 h,增菌時間不易過長,否 則雜菌也會相應增多。
      b) 選擇性增菌液 SC 中亞曬酸鹽與某些硫化物形成曬硫化合物可起到抑菌作用,脫氨酸可促進沙門氏菌生長,*適增菌溫度為 36℃,時間為 18 h-24h,比較適合傷寒沙門氏菌和甲型副傷寒沙門氏菌的增菌;啊’B中的主要抑菌劑為四硫磺酸銷和磺綠,*適增菌溫度為 42℃,時間為 18 h-24 h,比較適合其他沙門氏菌的增菌。所以需要同時使用SC 與TTB,可提高檢出率,以防漏檢。
      1.3 分離培養試驗注意事項
      a) 不同培養基選擇性強弱不同,一種培養基不可能適合的沙門氏菌,所以要同時使用兩種以上的培養基,須用一個BS,同時再用一個XLD 或 HE 或顯色培養基,形成互補,提高檢出率,以防漏檢。
      b) BS 較其他培養基抑菌作用強,沙門氏菌生長亦被減緩,所以要適當延長培養時間,培養40h-48 h。
      c) XLD、HE 培養基應前一天配制,次日使用,配制時勿需高壓滅菌,不易過分加熱,并于室溫、干燥、陰暗處保存,且不要快 過 48 h 使用,保存時間過長,會降低其選擇性。
      d) 沙門氏菌主要來源于糞便,而糞便中埃希氏菌屬占有優勢,所以在選擇性培養基中需加入乳糖指示系統和硫化氫指示系統。
      e) 觀察菌落特征,應觀察平板上獨立區域的單個菌落,而不要觀察片狀區域的菌落或衛星菌落。
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      1.4 生化試驗與血清學試驗申的注意事項
      a)分離純化可疑菌落,這一步至關重要,需要多次純化,如若菌落不純,會直接影響生化試驗的結果,尤其像山梨醇、甘露醇這類觀察接種前后顏色變化的項目。
      b) TSI易制成高層斜面,采用 18 mmX 180 mm 試管,高層斜面瓊脂分裝彭句為試管容量的三分之一, 且斜面與底層柱高的比例約為 1 : 2,如果底層柱高部分過少,則會影響穿剌后底層現象的觀察效果。
      c) 作肯定基質試驗用到的蛋白陳水中應含有豐富的色氨酸,因此每批蛋白陳買來后,應先用已知菌種鑒定后方可使用。
      d) 由于選擇性培養基含有抑菌劑,所以生長出的菌苔生化特性不是很好,會影響山梨醇、甘露醇接種前后顏色變化的判斷,快 易出現似黃非黃,似綠非綠這樣模棱兩可的結果。所以應盡量選擇營養瓊脂平板上的新鮮菌苔,如為營養瓊脂斜面,則選用斜面中段的菌苔,進行生化試驗及血清學試驗。
      e) 血清學鑒定,做玻片凝集試驗時,需檢查培養物有無自凝性,即生理鹽水對照。
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